价格:

¥170.00

CB6100 人外周血淋巴细胞分离液

规格:200ml

别名 : 人淋巴细胞分离液

英文名称 : Lymphocyte Separation Medium (Human)

保存:18-25℃避光储存,需无菌操作和保存。不可冷冻或冷藏,有效期至少2年。


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产品简介:

外周血中单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞等细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同,红细胞和粒细胞密度较大,为1.090 g/ml 左右,而淋巴细胞和单核细胞密度为1.0751.090 g/ml,血小板为1.0301.035 g/ml。经过密度梯度离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。本品适用于从人抗凝血液中分离单个核细胞(主要为淋巴细胞),无菌条件下所分离的细胞可用于免疫学检测。

分离方法说明及图例:

首先取新鲜抗凝血按体积比1:1 比例与样本稀释液(可用生理盐水代替)混匀,根据稀释后的体积,如果体积小于3ml,则在离心管中先加入3ml分离液,再在液面上小心加上血液,如果体积大于3ml,则需要等体积的分离液,但二者的总体积不能超过离心管的三分之二,否则在离心过程中会影响分离效果。注意:加入的二者不能混,不能冲破彼此液面,参考示意图。以400g-1000g(体积越大离心力越大时间越长具体需要自行优化,但不能超过1200g)离心20-30分钟,此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层:为血浆层。第二层:为环状乳白色淋巴细胞层。第三层:为透明分离液层。第四层:为红细胞层。收集第二层细胞放入含生理盐水4-5ml的试管中,充分混匀后,以400-1000g离心20-30分钟。沉淀经2次洗涤后即得所需淋巴细胞。提取率约为80%

注意事项:

1本分离液要求血液为新鲜抗凝血最好在采血2小时内使用,避免冷冻和冷藏;在收集血液和分离过程中,应注意无菌操作,避免微生物污染。血液的粘稠度可能影响分离的产量,因此可以适当调整与生理盐水的稀释比例。

2本实验要求,在正常大气压下,分离液、分离样本以及分离环境温度为20±2。分离液在低温时呈较高密度,在高温时呈较低密度。细胞分离液从冰箱取出后,不可立即使用,操作前可将样本和分离液置于20水浴中复温20分钟以保证分离温度。

3由于各品牌离心机的性能不同,国内南北地区温度环境和四季的差异,可能影响分离效果,用户可以调节离心转数和离心时间,摸索最佳的分离条件(具体分离条件各实验室自定)。

4吸取过多的淋巴细胞上面的血浆层可能会导致血浆蛋白及血小板的混杂。

5最好使用无静电反应的离心管,推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。

6最优抗凝剂选择:EDTA、枸橼酸、肝素。应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂体积。


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