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¥1000.00

RE0511 通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)

别名 : 通用RT-PCR试剂盒(M-MLV) 反转录试剂盒

英文名称 : Universal RT-PCR Kit(M-MLV)

储存条件 : -20℃

单位 : 盒


  • 产品详情
  • 产品属性

本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用M-MLV进行反转录反应,能够获得较长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配制的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的M-MLV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。


通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)产品简介

莫洛尼鼠白血病病毒反转录酶(M-MLV RT)是一种RNA依赖的DNA聚合酶,能使mRNA>5kb)转录为cDNAM-MLV RTRNase H活性相对于禽成髓细胞瘤病毒反转录酶较弱,更适合用来反转录较长的mRNAM-MLV RT应用于以RNA为模板合成cDNA的第一条链。

注意:M-MLV RT的延伸性要低于AMV 反转录酶,因此要得到和用AMV 反转录酶一样产量的cDNA需加入更多单位的M-MLV反转录酶。

通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)使用方法

1)使用方法简介以用2mgRNA为例。在无RNase离心管中,加入0.5mg引物至含总RNA的样品中,总体积不大于15ml70℃,5分钟打开模板链形成的二级结构。立即放于冰上降温防止二级结构恢复,随后短暂离心使液体集中在离心管底。

2)加入以下成分到已退火后的引物-模板混合物中。

注意:不要改变引物的加入比率。

M-MLV 5×Reaction Buffer                       5ml

dATP10mM                                 1.25ml

dCTP10mM                                 1.25ml

dGTP10mM                                 1.25ml

dTTP10mM                                 1.25ml

Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor         25 units

M-MLV RT                                    200 units

无核酸水至最后体积 25ml

3)轻轻混匀离心管,如果使用随机引物在37℃孵育60分钟,其他引物则42℃孵育。延伸温度在3742℃之间最佳。

4)M-MLV RT 用于合成cDNA的第一链。往后的合成则需要根据需要自行设计引物再次合成。

通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)Buffer组成

M-MLV RT 5×Reaction Buffer

250mM     Tris-HCl(PH 8.3 室温下)

375mM     KCl

15mM     MgCl2

50mM     DTT

通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)来源

大肠杆菌表达纯化

通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)保存条件

-20℃保存。避免经常冻融。


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