价格:

¥320.00

PN0120 BCA蛋白浓度测定试剂盒

英文名称 : BCA Protein Assay Kit

储存条件 : 按要求储存,有效期1年

单位 : 盒



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  • 产品属性

BCA法蛋白浓度测定试剂盒使用说明书

货号:PN0120

规格:500微孔/10000微孔    

保质期:有效期1年。

产品内容:                        

试剂名称

包装(500微孔)

保存

BCA试剂

100mL

室温

Cu试剂

3mL

室温

PBS稀释液

30mL

室温

BSA蛋白标准 (5mg/mL BSA)

1mL

-20

产品简介:

     碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+ Cu+BCA试剂形成紫蓝色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDSTriton X-100Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTAEGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

操作说明:

微孔酶标仪法

1、  配制工作液:根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)BCA工作液室温24小时内稳定。

2、  稀释标准品:取10μL BSA标准品用PBS稀释至100μL(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/mL。将标准品按0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μL加到96孔板的蛋白标准品孔中,加PBS补足至20μL

3、  将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20μL96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量样品时误差偏大,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

4、  各孔加入200μL BCA工作液,37放置15-30分钟。用酶标仪测定A562nm,根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

分光光度计法

       如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。

       步骤如下:

1、  配制工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂(50:1)配制成BCA工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)BCA工作液室温24小时内稳定。

2、  稀释标准品:取100μL BSA标准品用PBS稀释至1mL(样品一般可用PBS稀释),使终浓度为0.5mg/mL

3、  取八支(或者更多)5mL离心管,标上号,按下表加入试剂。

 

离心管号

1

2

3

4

5

6

7(样品管1

8(样品管2

9(样品管3

标准蛋白BSA

0

40μL

80μL

120μL

160μL

200μL

200μL适当稀释的样品1

200μL适当稀释的样品2

……

PBS

200μL

160μL

120μL

80μL

40μL

0

0

0

0

BCA工作液

2mL

2mL

2mL

2mL

2mL

2mL

2mL

2mL

2mL

4、  37放置15-30分钟。用分光光度计测562nm处吸光值,根据标准曲线计算出蛋白浓度。          

注意事项:

1、  长期不用时,Cu试剂与PBS稀释液可置于2-8保存,如发现细菌污染则应丢弃。BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时,可37温育使其完全溶解, 不影响使用。

2、  样品中若含有较多干扰物质时,请采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

3、  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 


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